“Digestion et carte de restriction”

Objectifs pratiques :
Réalisation d’une digestion par une enzyme de restriction.
Dépôts d’ADN dans les puits d’un gel d’agarose.
Mise en route d’une électrophorèse et coloration du gel.

Objectifs théoriques :
Approfondissement du principe de l’électrophorèse d’ADN.
Interprétation de l’effet de la dilution et de la digestion sur l’ADN de saumon.
Réalisation d’une carte de restriction à partir des bandes obtenues après électrophorèse d’ADN de phage lambda digéré par 2 enzymes de restriction en s’aidant de la notice pour établir les tailles des fragments en paires de bases.

Composition :
Pour réaliser 4 gels de 25 ml

• TBE 1X, 1L
  
• 1,6 g d’agarose (pour 8 gels de 25 ml)
  
• 25 pasteurettes à gouttes calibrées pour dépôts dans les puits
  
• 0,25 ml de bleu de dépôt
  
• 0,05 g d’ADN de saumon lyophilisé
  
• 50 µl d’enzyme de restriction EcoR1
  
• 125 µl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par EcoR1
  
• 125 µl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par HindIII
  
• 125 µl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par EcoR1 + HindIII
  
• 10 ml d’eau stérile
  Notice technique et pédagogique disponible sur notre site.
  
  Matériel nécessaire :
  Cuve à électrophorèse d’ADN (pour gel immergé)
  Générateur 70-110 V, 20 mA
  Bain-marie ou four à micro-ondes, Gants
  
  Conservation : 3 mois
  Enzyme et ADN : au congélateur
  Colorant (à l’abri de la lumière), tampon TAE, eau stérile : au réfrigérateur