“Carte de restriction et dépistage génétique”

Objectifs pratiques et théoriques :

• Dépôts d’ADN dans les puits d’un gel d’agarose. Mise en route d’une électrophorèse et coloration du gel
  
• Approfondissement du principe de l’électrophorèse d’ADN.
  
• Réalisation d’une carte de restriction après électrophorèse (en s’aidant de la notice pour établir les tailles des fragments en paires de bases).
  
• Identification de la mutation ponctuelle sur un ADN de phage lambda muté grâce aux digestions par des enzymes de restriction.
  
• Approfondissement du principe de dépistage génétique.
  
  Manipulation proposée :
  Réaliser une électrophorèse sur gel d’agarose à 8 puits des ADN du phage lambda (les produits fournis sont digérés). Comparaison des fragments de restriction obtenus pour identifier une mutation ponctuelle sur un ADN de phage lambda muté.
  
  Composition :
  Pour réaliser 4 gels de 25 ml
  
• 1,6 g d’agarose
  
• TBE 1X, 1L
  
• ADNs de phage lambda, de phage lambda digéré par EcoRI, digéré par HindIII et double digéré par EcoRI et HindIII (75 µl de chaque)
  
• ADNs de phage lambda muté, de phage lambda muté digéré par EcoRI, digéré par HindIII et double digéré par EcoRI et HindIII (75 µl de chaque)
  Notice technique et pédagogique disponible sur notre site.
  
  Matériel nécessaire :
  Cuve à électrophorèse d’ADN (pour gel immergé)
  Générateur 70-110 V, 20 mA
  Bain-marie ou micro-onde
• Gants
  Micropipettes de 5 à 50 µl et cônes adaptés
  
  Conservation : 3 mois
  ADN : au congélateur
  Colorant (à l’abri de la lumière), tampon TAE, eau stérile : au réfrigérateur