“Digestion et localisation de sites de coupure”

Manipulation proposée :
Digestion d’ADN de phage lambda par une enzyme XhoI, EcoRI et HindIII à action rapide (5 minutes) (faite par les élèves)
Électrophorèse sur gel d’agarose à 8 puits des ADN de phage lambda et de phage lambda digéré par XhoI, par EcoRI et par HindIII
Interprétations des résultats en s’appuyant sur la notice pour trouver la taille des bandes d’ADN obtenues et localiser les sites de coupure

Composition :
Pour réaliser 4 gels de 25 ml

• 1,6 g d’agarose
  
• TBE 1X, 1L
  
• 106 µl d’ADN de phage lambda
  
• 8 µl d’enzyme de restriction XhoI à digestion rapide
  
• 8 µl d’enzyme de restriction EcoRI à digestion rapide
  
• 8 µl d’enzyme de restriction HindIII à digestion rapide
  
• 100 µl de tampon pour enzyme de restriction à action rapide
  
• 250 µl de bleu de dépôt
  Notice technique et pédagogique disponible sur notre site.
  
  Matériel nécessaire :
  Cuve à électrophorèse d’ADN (pour gel immergé)
  Générateur 70-110 V, 20 mA
  Bain-marie ou micro-onde
• Gants
  Micropipettes de 5 à 50 µl et cônes adaptés
  
  Conservation : 3 mois
  ADN, enzymes de restriction et tampon de digestion : au congélateur
  Colorant (à l’abri de la lumière), Tampon TAE, eau stérile : au réfrigérateur